荧光定量PCR实验
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qPCR: Quantitative Real-time PCR,中文名是 实时荧光定量PCR。qPCR是一种在DNA扩增反应中，以荧光化学物质测每次聚合酶链式反应（PCR）循环后产物总量的方法。通过内参对待测样品中的特定DNA序列进行定量分析的方法。
TakaRa 试剂盒PrimeScript™ RT reagent Kit with gDNA Eraser (Perfect Real Time)，SYBRGreenⅠ法。
实验步骤：
一，去除基因组DNA反应：
全波长酶标仪测出RNA浓度（单位ng/ul）;按照以下剂量配制10ul体系
| 试剂 | 使用量 |
| 5×gDNA Eraser Buffer | 2 μl |
| Buffer 2.0 μl gDNA Eraser | 1 ul |
| Total RNA | 1ug/RNA浓度 |
| RNase Free dH2O | Up to10 ul |
PCR程序：42℃ 2min
4℃ ∞
二，反转录反应：
按照以下剂量配制20ul体系：
| 试剂 | 使用量 |
| 步骤 1 的反应液 | 10 ul |
| PrimeScript RT Enzyme Mix I | 1 ul |
| RT Primer Mi | 1 ul |
| 5×PrimeScript Buffer 2（for Real Time） | 4 ul |
| RNase Free dH2O | 4 ul |
| Total | 20 ul |
PCR程序：37℃ 15min
85℃ 5s
4℃ ∞
三，Real Time PCR
按照以下剂量配制20ul体系：
| 试剂 | 使用量 |
| SYBR@ Premix Ex TaqII(2X） | 10 ul |
| F Primer(10uM) | 0.8 ul |
| R Primer(10uM) | 0.8 ul |
| ROX Reference II | 0.4 ul |
| 反应2的DNA模板 | 2 ul |
| ddH2O | 6 ul |
四，仪器设置
仪器使用的是荧光定量PCR仪Q6-96，设置界面如下图：
